安益譜 TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)在檢測(cè)人血漿中變腎上腺素類(lèi)物質(zhì)和3-甲氧酪胺含量中的應(yīng)用
在臨床診斷和研究中，準(zhǔn)確檢測(cè)人體血液中的生物標(biāo)志物對(duì)于疾病的早期診斷和治療監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。變腎上腺素類(lèi)物質(zhì)（Metanephrines, MNs）和3-甲氧酪胺（3-Methoxytyramine, 3-MT）作為重要的神經(jīng)遞質(zhì)和激素代謝產(chǎn)物，其在血液中的含量檢測(cè)對(duì)于嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤的診斷具有重要意義。傳統(tǒng)檢測(cè)方法如高效液相色譜（HPLC）和免疫法存在靈敏度和特異性不足的問(wèn)題。本文介紹了一種基于ANYEEP TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)的新方法，用于同時(shí)檢測(cè)人血漿中的甲氧基腎上腺素（Metanephrine, MN）、甲氧基去甲腎上腺素（Normetanephrines, NMN）和3-甲氧酪胺（3-MT），并驗(yàn)證了該方法的準(zhǔn)確性和可靠性。
安益譜TQ9100三重四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀
一、引言
兒茶酚胺（Catecholamine, CA）是人體重要的神經(jīng)遞質(zhì)和激素，其在嗜鉻細(xì)胞內(nèi)的兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（Catechol-O-methyltransferase, COMT）的催化作用下代謝成變腎上腺素類(lèi)物質(zhì)（Metanephrines, MNs）。MNs包括甲氧基腎上腺素（Metanephrine, MN）和甲氧基去甲腎上腺素（Normetanephrines, NMN）。由于MNs較CA的半衰期長(zhǎng)，性質(zhì)穩(wěn)定且能直接反映嗜鉻細(xì)胞的狀態(tài)，因此臨床上通過(guò)檢測(cè)血液中MNs的含量來(lái)輔助診斷嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤。這些檢測(cè)方法是《嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤診斷治療專(zhuān)家共識(shí)（2020版）》和《中國(guó)繼發(fā)性高血壓臨床篩查多學(xué)科專(zhuān)家共識(shí)（2023）》等專(zhuān)家共識(shí)推薦的首選標(biāo)志物。
目前，MNs的分析方法主要包括HPLC法和免疫法，但這些方法存在靈敏度較低或特異性較差的問(wèn)題。為了克服這些局限性，本研究采用ANYEEP TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，同時(shí)檢測(cè)人血漿中的MN、NMN和3-MT，以提供一種更高效、更準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。
二、實(shí)驗(yàn)部分
（一）樣品處理
取待測(cè)樣本500μL于1.5mL EP管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液20μL，渦旋混勻（2500 rpm，30s）。使用WCX填料的96孔固相萃取板，先用200μL水活化，待水流干后，加入上述樣本，通過(guò)正壓萃取裝置進(jìn)行固相萃取。待樣本流干后，先后加入500μL水和500μL乙腈淋洗樣本。待淋洗液流干后，加100μL乙腈（含2%FA）洗脫樣本。洗脫液在25℃下用氮?dú)獯蹈?0分鐘，用100μL復(fù)溶液（50%乙腈，含0.1%甲酸）復(fù)溶。最后，取20μL進(jìn)樣。
（二）色譜條件
色譜柱使用Phenomenex Kinetex F5 Column 3.0mm×100mm 2.6μm進(jìn)行液相分離。流動(dòng)相A為水（含0.1%甲酸），流動(dòng)相B為乙腈，柱溫40℃。梯度洗脫條件如表1所示：
表1 梯度洗脫條件
| 時(shí)間 (min) | 流速 (mL/min) | A相 (%) | B相 (%) |
|---|---|---|---|
| 0 | 0.25 | 95 | 5 |
| 1.5 | 0.25 | 95 | 5 |
| 2.8 | 0.25 | 90 | 10 |
| 2.9 | 0.25 | 5 | 95 |
| 3.4 | 0.25 | 5 | 95 |
| 3.5 | 0.25 | 95 | 5 |
| 6.0 | 0.25 | 95 | 5 |
（三）質(zhì)譜條件
采用電噴霧離子化源正離子模式（ESI+）多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行質(zhì)譜掃描。離子化源溫度550℃，噴霧電壓5000V，氣簾氣20psi，霧化氣60psi，輔助加熱氣60psi，碰撞氣8，EP 7.5V，CXP 0V。各化合物離子對(duì)參數(shù)如表2所示：
表2 MNs、3-MT及內(nèi)標(biāo)MRM離子對(duì)參數(shù)
| 待測(cè)物名稱(chēng) | Q1離子 | Q3離子 | 駐留時(shí)間 (ms) | CE (V) | DP (V) |
|---|---|---|---|---|---|
| MN* | 180.1 | 148.1 | 20 | 12 | 110 |
| MN | 180.1 | 120.1 | 20 | 12 | 110 |
| MN-d3 | 183.1 | 151.1 | 20 | 12 | 110 |
| NMN* | 166.1 | 134.1 | 20 | 10 | 50 |
| NMN | 166.1 | 121.1 | 20 | 10 | 50 |
| NMN-d3 | 169.1 | 137.1 | 20 | 10 | 50 |
| 3-MT* | 151.1 | 91.1 | 20 | 17 | 120 |
| 3-MT | 151.1 | 119.1 | 20 | 15 | 120 |
| 3-MT-d4 | 155.1 | 95.1 | 20 | 15 | 105 |
注： 為定量離子對(duì)
總結(jié)
本研究采用ANYEEP TQ9100液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，成功實(shí)現(xiàn)了人血漿中變腎上腺素類(lèi)物質(zhì)（MN、NMN）和3-甲氧酪胺（3-MT）的同時(shí)檢測(cè)。該方法線性好、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能夠?yàn)槭茹t細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤的臨床診斷提供可靠的檢測(cè)手段。ANYEEP TQ9100系統(tǒng)的高效檢測(cè)能力和穩(wěn)定的性能，使其成為生物標(biāo)志物檢測(cè)領(lǐng)域的有力工具，為相關(guān)疾病的早期診斷和治療監(jiān)測(cè)提供了重要的技術(shù)支持。
