國產(chǎn)質(zhì)譜儀-安益譜TQ9100 針對GB23200.121-2021植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量測定的完整解決方案
本文基于安益譜公司Anyeep TQ9100超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)，建立了針對常見植物源性食品中236種農(nóng)藥的超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜分析方法。采用該方法對青椒、梨、大米、食用油、茶葉等基質(zhì)樣品進行分析，線性和重復(fù)性結(jié)果良好，檢測限和定量限均滿足 GB23200.121-2021的要求。利用本方法和設(shè)備可實現(xiàn)對 蔬果、谷物、油料、茶葉等植物源性食品基質(zhì)農(nóng)藥殘留的檢出和定量。
引言
2021年3月3日，國家衛(wèi)生健康委員會、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國家市場監(jiān)督管理總局聯(lián)合發(fā)布GB23200.121-2021《植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》，并于2021年9月3日正式實施。該標準是國內(nèi)首個單針測定農(nóng)藥殘留品種最多的LC-MS/MS 國標，相較于之前的NY/T761和GB/T 20769等液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測標準存在的前處理復(fù)雜、適用基質(zhì)有限、部分農(nóng)藥定量限不能滿足MRL值要求、總體適用性較差等問題，新標準引入了QuECHERS 前處理方法，大大簡化了實驗前處理流程，一種前處理方法即可同時用于LCMS/MS 和GC-MS/MS檢測。
新標準適用于多種植物源性食品，包括水果、蔬菜、糧食、油料、茶葉、堅果和香辛料、食用菌等多種農(nóng)產(chǎn)品，可以全面覆蓋各類植物源性食品。本方法參考GB23200.121-2021對植物源性食品進行前處理。質(zhì)譜采用ESI源，正負切換模式同時采集，動態(tài)MRM（DMRM）分段掃描檢測，外標法定量。
儀器與試劑
Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)
甲醇（質(zhì)譜純，美國Thermo Fisher 公司）
甲酸（質(zhì)譜純，德國CNW 公司）
甲酸銨（色譜純，德國Merck 公司）
乙腈（質(zhì)譜純，美國Thermo Fisher 公司）
水（超純水）
氯化鈉（農(nóng)殘純，上海阿拉?。?/p>
無水硫酸鎂（農(nóng)殘純，上海安譜）
檸檬酸鈉二水合物（農(nóng)殘純，上海麥克林）
檸檬酸二鈉鹽倍半水合物（農(nóng)殘純，上海麥克林）
乙酸鈉（農(nóng)殘純，上海安譜）
陶瓷均質(zhì)子（上海安譜，60105-370-B）
PSA（上海安譜，SBEQ-CA2401-10g）
GCB（40-120 μm，上海安譜，GEEQ-072012）
微孔濾膜（0.2μm，上海安譜，50120965 ）
化合物信息及溶劑配制
標準品信息
1、236種農(nóng)藥標準溶液混標，濃度50 μg/mL（購于壇墨）
2、儲備液：精確吸取相應(yīng)標準品溶液，用乙腈稀釋配置成10μg/mL的混合儲備液
3、標準曲線溶液：以QuEChERS凈化后的對應(yīng)的植物源性食品空白基質(zhì)作為溶劑，稀釋成系列工作標準溶液，2、5、10、20、50、100、200和500ng/mL，考察儀器靈 敏度、重現(xiàn)性和線性范圍
液相條件
流動相A：0.01%甲酸-水（含2mM 甲酸銨 ）
流動相B：0.01%甲酸-乙腈（含2mM 甲酸銨）
色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，2.1×100 mm，1.7μm
流速：0.3mL/min
柱溫：40℃
進樣量：5μL
梯度洗脫程序見表2
質(zhì)譜條件
離子化源：電噴霧離子化源（ESI±）
溫度：550℃
噴霧電壓：5000V
氣簾氣： 35psi
霧化器： 60psi
輔助加熱氣：60psi
碰撞氣：12
掃描模式：DMRM
部分待測物采集信息
樣品前處理
蔬菜、水果、食用菌和糖料 （舉例）
稱取10g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加入10mL乙腈及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩1min，加入4g無水硫酸鎂、1g氯化鈉、1g檸檬酸鈉、0.5g檸檬酸氫二鈉，劇烈震蕩1min后4200r/min 離心5min。吸取1mL上清液至內(nèi)含150mg無水硫酸鎂、25mg PSA的2mL塑料離心管中；對于顏色較深的試樣，離心管中另加入2.5mg GCB，渦旋混勻1min。4200r/min離心5min， 吸取上清液過微孔濾膜，待測定。對于干制蔬菜、水果和食用菌，稱取1g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加9mL水渦旋混勻，靜置30min后按上述方式處理。
實驗結(jié)果與討論
快速定量篩查方法的建立
采集軟件TQMS Data Acquisition Software 支持快速建立植物源性基質(zhì)多農(nóng)殘的定量篩查采集方法。在軟件方法編 輯模塊的質(zhì)譜方法界面，切換到DMRM掃描類型，通過右鍵導(dǎo)入xls格式的農(nóng)殘方法掃描表（包含化合物名稱、保留時間、離子對、DP 和CE 等質(zhì)譜參數(shù)）即可實現(xiàn)。無需手動輸入化合物信息，既能節(jié)省大量工作時間，也可避免手動輸入引起的錯誤，可實現(xiàn)對植物源性食品中多種 待測物進行高通量的采集，如圖所示。
236種農(nóng)藥殘留采集方法的快速建立
定量軟件TQMS Data Processing Software 還支持樣品農(nóng)殘超限的智能判讀。通過導(dǎo)入軟件內(nèi)置的國標限值要求表，輸入樣品基質(zhì)類型，即可對樣品中不同種類的農(nóng)藥殘留值進行超限判讀和統(tǒng)計，實現(xiàn)快速篩查，如圖所示。
農(nóng)殘含量超限智能判讀
農(nóng)殘含量超限統(tǒng)計
本方法基于GB23200.121-2021 QuEChERS 提取法對4類植物源性基質(zhì)進行前處理，在TQ9100上一針進樣，正負模式同時采集，并使用動態(tài)MRM（DMRM）分段掃描，可在30min內(nèi)實現(xiàn)對植物源性食品中236種農(nóng)藥的篩查和定量，可大量節(jié)省人力和物力成本。各待測組分在保留時間窗口內(nèi)均可以實現(xiàn)高效的色譜分離效果，且峰型良好，如圖所示。
梨基質(zhì)中236種農(nóng)藥（472對MRM ）XIC疊加圖（10 ng/mL）
方法靈敏度，線性及范圍
本方法選取4類植物源性空白樣品，分別按照2.5進行前處理后得到空白基質(zhì)溶液，將混合標準溶液逐級用其稀釋成濃度在2-500ng/mL范圍內(nèi)的8個校準級別的基質(zhì)標準品，得到校正曲線，分別對4類植物源性樣品中的農(nóng)藥殘留進行定量分析。結(jié)果表明在基質(zhì)標曲條件下，所有待測農(nóng)殘組分的線性相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99，線性關(guān)系良好（表4）。方法中236種農(nóng)殘的定量限均可以達到GB23200.121-2021 中規(guī)定的4類基質(zhì)對應(yīng)的定量限要求，能夠滿足常規(guī)多種農(nóng)藥殘留檢測的需求。在定量限條件下，所有測定的農(nóng)殘化合物均能獲得良好的譜圖效果（圖3），可實現(xiàn)準確定量定性分析。
基質(zhì)曲線10 ng/mL濃度下部分化合物的定量定性離子疊加圖
方法精密度和回收率
分別在4類樣品基質(zhì)的定量限添加水平下進行了加標回收率的測試，考查了Anyeep TQ9100對236種農(nóng)藥殘留測試的準確性和穩(wěn)定性。結(jié)果表明，4種樣品基質(zhì)的236種農(nóng)殘回收率均在60-120%之間，精密度CV不超過15%，其中表5匯總了部分化合物的加標回收率和精密度結(jié)果。
實驗總結(jié)
本文使用Anyeep TQ9100 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)建立了4種植物源性基質(zhì)（梨、食用油、大米、茶葉）中236種農(nóng)藥及其代謝物測定的方法，使用基質(zhì)標曲進行定量。從結(jié)果可見，該方法具備優(yōu)異的靈敏度、穩(wěn)定性和線性范圍，可滿足各類植物源性食品農(nóng)藥殘留的常規(guī)檢測。
